1. Clasificación
A electroforese en xel divídese en tipos verticais (incluíndo xeles de columna e xeles de lousa) e tipos horizontais (principalmente xeles de lousa) (Figura 6-18). Xeralmente, a separación vertical é lixeiramente superior á horizontal, pero a preparación do xel horizontal ten polo menos catro vantaxes: hai soporte debaixo de todo o xel, permitindo o uso de agarosa de baixa concentración; é posible preparar placas de xel de agarosa de diferentes especificacións; a preparación do xel e a carga de mostras son máis convenientes; a cámara de electroforese é fácil de construír e rendible. Dado que a electroforese horizontal realízase coa placa de xel de agarosa completamente mergullada aproximadamente 1 mm por debaixo da superficie do tampón de electroforese, tamén se denomina electroforese mergullada.
Tanque de electroforese DYCP-31DN para electroforese en xel de agarosa
2.Sistema tampón
Na separación de ácidos nucleicos, a maioría dos sistemas adoptan sistemas continuos. Os tampóns de electroforese comúnmente utilizados inclúen o tampón TBE (0,08 mol/L Tris·HCl, pH 8,5, 0,08mol/L de ácido bórico, 0,0024mol/L EDTA) e THE (0,04mol/L Tris·HCl, pH 7,8, 0,02mol/L). acetato de sodio, tampón EDTA 0,0018 mol/L). Estes tampones prepáranse xeralmente como solucións stock 10x e dilúense ata a concentración necesaria cando se usan. As taxas de migración do ADN lineal e circular no xel de agarosa varían segundo o tampón utilizado. No tampón THE, a taxa de migración do ADN lineal é maior que a do ADN circular, mentres que no tampón TBE ocorre o contrario.
3.Preparación de xel de agarosa
(1) Preparación de xel de agarosa horizontal
(a) Prepare a concentración necesaria de xel de agarosa usando un tampón de electroforese 1x.
(b) Quenta a agarosa ata completar a disolución nun baño de auga fervendo, nun axitador magnético ou nun microondas. Arrefría a solución de agarosa a 55 °C e engade colorante de bromuro de etidio (EB) ata unha concentración final de 0,5 μg/ml.
(c) Sela os bordos das placas de vidro ou acrílico cunha pequena cantidade de xel de agarosa, engade un peite e coloque os dentes do peite a uns 0,5 ~ 1,0 mm por riba da placa.
(d) Verter a solución de xel de agarosa derretido continuamente no molde de placa de vidro ou acrílico (o grosor depende do volume da mostra de ADN), evitando a introdución de burbullas de aire. Deixa que se solidifique de forma natural a temperatura ambiente.
(e) Retire coidadosamente o pente despois da solidificación completa. Engade unha cantidade adecuada de tampón de electroforese ao tanque de xel, asegurándose de que a placa de xel estea mergullada uns 1 mm por debaixo da superficie do tampón de electroforese.
(2) Preparación do xel de agarosa vertical
(a) Elimine a graxa ou os residuos das placas de vidro lavando con etanol.
(b) Coloque placas separadoras entre as presas dianteira e traseira, aliña os bordos das placas separadoras coas presas dianteira e traseira e fíxaas con abrazaderas.
(c) Engade un 2% de agarosa nun tampón 1x entre os bordos das placas espaciadoras para formar un tapón de agarosa de 1 cm de altura na parte inferior da cámara de fundición de xel.
(d) Verter o xel de agarosa derretido na concentración desexada, preparado nun tampón 1x, na cámara de xel ata 1 cm por debaixo da parte superior.
(e) Insira o pente, evitando que as burbullas de aire queden atrapadas baixo os dentes do pente. Ás veces, poden aparecer engurras nos dentes do pente durante o arrefriamento do xel de agarosa; nestes casos, basta con engadir algo de agarosa derretida na parte superior para solidificala.
(f) Retire o peite. Para evitar fugas de tampón na ranura de carga, sela a conexión entre a placa de xel de agarosa e a cámara de electroforese cun 2% de agarosa e engade a cantidade necesaria de tampón.
(g) Engade 1x tampón de electroforese á cámara de xel.
(h) Cargue con coidado as mostras de ADN no xel de agarosa debaixo do tampón.
Máis información sobre os coñecementos básicos sobre a electroforese en xel de agarosa, compartirémola a próxima semana. Desexa que esta información sexa útil para o teu experimento.
Beijing Liuyi Biotechnology Co Ltd (Liuyi Biotechnology) especializouse na fabricación de instrumentos de electroforese durante máis de 50 anos co noso propio equipo técnico profesional e centro de I + D. Temos unha liña de produción fiable e completa, desde o deseño ata a inspección e o almacén, así como soporte de mercadotecnia. Os nosos produtos principais son a célula de electroforese (tanque/cámara), a fonte de alimentación de electroforese, o transiluminador LED azul, o transiluminador UV, o sistema de análise e imaxe de xel, etc.
Agora estamos á procura de socios, tanto o tanque de electroforese OEM como os distribuidores son benvidos.
Se tes algún plan de compra dos nosos produtos, non dubides en contactar connosco. Podes enviarnos unha mensaxe ao correo electrónico[correo electrónico protexido]ou[correo electrónico protexido], ou chámanos ao +86 15810650221 ou engade Whatsapp +86 15810650221 ou Wechat: 15810650221.
Escanee o código QR para engadir en Whatsapp ou WeChat.
Hora de publicación: Dec-07-2023