Preparación da mostra eCargando
Debido ao uso dun sistema tampón continuo sen xel de apilado na maioría dos casos, as mostras deben ter unha concentración adecuada e un volume pequeno. Use apipetaengadir lentamente a mostra, con 5-10 μg por pozo, para evitar unha diminución importante da resolución. Candocargando mostra, a fonte de alimentación debe estar desactivada. A mostra debe conter un colorante indicador (azul de bromofenol 0,025% ou laranxa) e sacarosa (10-15%) ou glicerol (5-10%) para aumentar a súa densidade, concentrar a mostra e evitar a difusión. Non obstante, ás veces a sacarosa ou o glicerol poden causar bandas en forma de U nos resultados da electroforese, o que se pode evitar mediante o uso de Ficoll ao 2,5% (polivinilpirrolidona).
Electroforese
A tensión para a electroforese é de 5-15 V/cm, xeralmente ao redor de 10 V/cm. Para a separación de moléculas grandes, a tensión debe ser menor, normalmente non superando os 5 V/cm.
Tinción
O colorante fluorescente bromuro de etidio (EB) utilízase habitualmente para a tinción para observar as bandas de ADN en xel de agarosa. EB pode inserirse entre pares de bases de moléculas de ADN, facendo que EB se una ao ADN. A absorción de luz ultravioleta de 260 nm polo ADN transfírese a EB, e o EB unido emite fluorescencia a 590 nm na rexión vermella-laranxa do espectro de luz visible. A tinción do xel nunha solución de MgSO4 a 1 mmol/L durante 1 hora pode reducir a fluorescencia de fondo causada polo EB non unido, facilitando a detección de pequenas cantidades de ADN.
O colorante EB ten varias vantaxes: é fácil de usar, non rompe os ácidos nucleicos, ten unha alta sensibilidade e pode manchar tanto o ADN como o ARN. O EB pódese engadir á mostra e rastrexarse mediante a absorción UV en calquera momento. Despois da tinción, o EB pódese eliminar mediante extracción con n-butanol.
Non obstante, o colorante EB é un potente mutáxeno e durante a manipulación deben tomarse precaucións, como o uso de luvas de polietileno. A laranxa de acridina tamén é un colorante de uso habitual porque pode diferenciar entre ácidos nucleicos monocatenarios e bicatenarios (ADN, ARN). Presenta fluorescencia verde (530 nm) para ácidos nucleicos de dobre cadea e fluorescencia vermella (640 nm) para ácidos nucleicos monocatenarios. Ademais, pódense usar outros colorantes como o azul de metileno, o verde de metileno e a quinolina B para a cor.
Beijing Liuyi Biotechnology Co Ltd (Liuyi Biotechnology) especializouse na fabricación de instrumentos de electroforese durante máis de 50 anos co noso propio equipo técnico profesional e centro de I + D. Temos unha liña de produción fiable e completa, desde o deseño ata a inspección e o almacén, así como soporte de mercadotecnia. Os nosos produtos principais son a célula de electroforese (tanque/cámara), a fonte de alimentación de electroforese, o transiluminador LED azul, o transiluminador UV, o sistema de análise e imaxe de xel, etc.
Agora estamos á procura de socios, tanto o tanque de electroforese OEM como os distribuidores son benvidos.
Se tes algún plan de compra dos nosos produtos, non dubides en contactar connosco. Podes enviarnos unha mensaxe ao correo electrónico[correo electrónico protexido]ou[correo electrónico protexido], ou chámanos ao +86 15810650221 ou engade Whatsapp +86 15810650221 ou Wechat: 15810650221.
Escanee o código QR para engadir en Whatsapp ou WeChat.
Hora de publicación: 20-12-2023