Principio
A electroforese de película de acetato de celulosa é un método de electroforese que utiliza unha película de acetato de celulosa como soporte. O fenómeno no que as partículas cargadas se desprazan cara ao electrodo oposto baixo a acción do campo eléctrico chámase electroforese. Dado que cada proteína ten un punto isoeléctrico específico, se unha proteína se coloca nunha solución cun pH inferior ao seu punto isoeléctrico, a proteína cargarase positivamente e moverase cara ao electrodo negativo. Pola contra, móvese ao polo positivo. Dado que a velocidade das moléculas de proteínas que se moven nun campo eléctrico está relacionada coa súa carga, a forma e o tamaño das moléculas, pódense separar diferentes proteínas mediante electroforese. O soro contén unha variedade de proteínas, todas elas teñen puntos isoeléctricos a pH 7,5 ou menos. Cando o soro se coloca nun tampón de pH 8,6 para realizar a electroforese, todas as proteínas do soro están cargadas negativamente e moveranse cara ao lado positivo no campo eléctrico. Dado que varias proteínas do soro teñen diferentes cargas ao mesmo pH, as partículas moleculares son diferentes en tamaño e, polo tanto, a velocidade de migración é diferente, e están separadas por electroforese. Os puntos isoeléctricos e os pesos moleculares das proteínas do soro móstranse na seguinte táboa:
| Proteína | Puntos isoeléctricos (PI) | Peso molecular |
| Albúmina | 4,88 | 69 000 |
| α1-gloulina | 5.00 | 200 000 |
| α2-gloulina | 5.06 | 300 000 |
| β-gloulina | 5.12 | 9 000 ~ 150 000 |
| γ-gloulina | 6,85~7,50 | 156 000 ~ 300 000 |
O experimento consiste en separar diferentes proteínas no soro sanguíneo cunha membrana de acetato de celulosa (abreviatura CAM) como medio de soporte. CAM é unha especie de loos de escumaepelícula con bo uniforme, e o espesor é de 0,1 mm-1,5 mm, que ten unha certa absorción de auga.
Materiais, instrumentos e reactivos para a electroforese CAM
Mostras:soro de sangue humano saudable
Instrumento:fonte de alimentación DYY-6C, tanque de electroforese DYCP-38C, carga de mostra superior WD-9404
Os reactivos
1) Membrana de acetato de celulosa 7X9cm
2) Solución tampón de barbitol PH 8,6 (forza iónica 0,05-0,09, é 0,06 tid de tempo): tome 1,84 g de ácido dietil barbitúrico e, a continuación, tome 1,03 g de dietil pentobarbital sódico, engade auga destilada para quentar para disolverse e faga ata 1000 ml;
3) Mancha: Ponceau S 0,2 g, tricloroacético 3 g, engade 100 ml de auga destilada;
4) TBS/T ou PBS/T: 45 ml de etanol ao 95 %, 5 ml de ácido acético glacial, engade 50 ml de auga destilada;
5) Solución de limpeza: 70 ml de etanol anhidro, 30 ml de ácido acético glacial.
Experimento Métodod
1) Prepara a membrana: mergulla a membrana na solución tampón de barbitol 30min-8h, sácaa, retira a solución extra con papel absorbente.
2) Carga de mostras: Distingue o lado áspero e o lado liso da membrana e marca unha liña a 1,5 cm de distancia ata o extremo superior do lado áspero. Cargue mostras mediante unha ferramenta de carga superior de mostras no lado áspero. Nota: as mostras deben cargarse no lado áspero da membrana. Despois de que as mostras de soro estean completamente penetradas na membrana, bótase a volta da membrana, coloque o lado áspero (con mostras) cara abaixo cara ao tanque e o extremo coas mostras colócase nun electrodo negativo.
3) Electroforese: conectar a fonte de alimentación, 0,4～Membrana de 0,6 m A/cm, o tempo de execución é de 30-45 min. Despois de executar a electroforese, desconecte a alimentación.
4) Mancha e limpa: Saca a membrana do tanque e mergúllalait na solución de colorante durante 5 minutos, e despois límpao na solución de limpeza unha e outra vez durante 3-4 veces ata que a cor de fondo estea clara. As proteínas séricas deben mostrarse nas bandas, e normalmente hai cinco zonas, forman o extremo superior da liña marcada, Albúmina, α1-gloulina, α2-gloulina, β-gloulina, γ-gloulina.
5) Conservación: poñer a electroforese secabandaen solución de limpeza durante 10-15 minutos, e despois sácao e pégalo nun vaso limpo, despois de que seque, converterase nunha película transparente.banda.
ExperimentaResultado
O efecto de separación das mostras de soro é bo e non hai ningún fenómeno de cola de banda. A repetibilidade dos resultados varía debido aos procedementos de proba e aos métodos do experimentador, e a repetibilidade é alta.
Conclusión
Sistema de detección de electroforese clínica rápida (Tanque de electroforeseDYCP-38C,fonte de alimentaciónDYY-6C e carga de mostra superior WD-9404) producidos polo nosoempresa Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdcumpre os requisitos experimentais,eos resultados son reproducibles, sinxelos e rápidos, axeitados paraensinoinvestigación.
Pequín LiuyiBiotechnology Co., Ltd está especializada na fabricación de produtos de electroforesis para a industria das ciencias da vida, queten máis de 50 anos de historia en China e a empresa pode ofrecer produtos estables e de alta calidade en todo o mundo. A través de anos de desenvolvemento, é digno da súa elección!
Agora estamos á procura de socios, tanto o tanque de electroforese OEM como os distribuidores son benvidos.
Para obter máis información sobre nós, póñase en contacto connosco por correo electrónico[correo electrónico protexido]ou[correo electrónico protexido].
Hora de publicación: 14-novembro-2022