Introdución
A electroforese en xel é unha técnica fundamental en bioloxía molecular, moi utilizada para a separación de proteínas, ácidos nucleicos e outras macromoléculas. O control axeitado do volume da mostra, a tensión e o tempo de electroforese é fundamental para conseguir resultados precisos e reproducibles.O noso compañeiro de laboratorio ofrecemellores prácticas para xestionar estes parámetros durante a electroforese en xel SDS-PAGE.
Pequín Liuyi Biotechnology produtos de electroforese en xel
Volume de mostra: garantindo a coherencia
Cando se realiza a electroforese SDS-PAGE, o volume da mostra é un factor clave que pode afectar significativamente a resolución dos seus resultados. En xeral, recoméndase cargar 10 µL de proteína total por pozo. Para garantir a consistencia e evitar a difusión da mostra entre os pozos adxacentes, é importante cargar un volume igual de tampón de carga 1x en calquera pozo baleiro. Esta precaución contribúe a evitar a propagación de mostras polas vías veciñas, o que pode ocorrer se o pozo se deixa baleiro.
Antes de cargar as mostras, comeza sempre engadindo un marcador de peso molecular nun pozo. Isto permite identificar facilmente o tamaño das proteínas despois da electroforese.
Control de voltaxe: equilibrio de velocidade e resolución
A tensión aplicada durante a electroforese afecta directamente tanto á velocidade á que migran as mostras a través do xel como á resolución da separación. Para SDS-PAGE, é recomendable comezar cunha baixa tensión de arredor de 80V. Esta baixa tensión inicial permite que as mostras migren lenta e uniformemente, concentrándoas nunha banda nítida mentres entran no xel separador.
Unha vez que as mostras entraron completamente no xel separador, a tensión pódese aumentar a 120 V. Esta maior tensión acelera a migración, garantindo que as proteínas se separen de forma eficiente segundo o seu peso molecular. É esencial controlar o progreso da fronte de colorante azul de bromofenol, o que indica a finalización da electroforese. Para xeles cunha concentración do 10-12%, normalmente é suficiente 80-90 minutos; non obstante, para os xeles do 15%, é posible que necesites ampliar un pouco o tempo de execución.
Xestión do tempo: saber cando parar
O tempo é outro factor crítico na electroforese en xel. Executar o xel durante un período demasiado longo ou moi curto pode levar a unha separación subóptima. A migración do colorante azul de bromofenol é un indicador útil: cando chega ao fondo do xel, adoita ser hora de deter a carreira. Para xeles estándar, como o 10-12%, unha duración da electroforese duns 80-90 minutos é normalmente adecuada. Para xeles de maior porcentaxe, como o 15%, o tempo de execución debe ampliarse para garantir a separación completa das proteínas.
Xestión de buffers: reutilización e preparación de buffers
O tampón de electroforese pódese reutilizar 1-2 veces, dependendo das condicións específicas do seu laboratorio. Non obstante, para obter resultados óptimos, recoméndase preparar un tampón 10x fresco e dilúelo xusto antes do uso. Isto garante que o tampón manteña a súa eficacia, o que leva a resultados de electroforese máis fiables.
Pequín Liuyi Biotechnology produtos de electroforese en xel
Ao controlar coidadosamente o volume da mostra, a tensión e o tempo de electroforese, pode mellorar significativamente a precisión e a reproducibilidade dos resultados da electroforese en xel. A implementación destas mellores prácticas no seu traballo de laboratorio axudarache a conseguir bandas máis claras e distintas, o que levará a mellores datos para a análise posterior.
Se tes máis bos métodos para optimizar o experimento de electroforese en xel, benvido a discutir connosco.
Beijing Liuyi Biotechnology Co Ltd (Liuyi Biotechnology) especializouse na fabricación de instrumentos de electroforese durante máis de 50 anos co noso propio equipo técnico profesional e centro de I + D. Temos unha liña de produción fiable e completa, desde o deseño ata a inspección e o almacén, así como soporte de mercadotecnia. Os nosos principais produtos son a célula de electroforese (tanque/cámara), a fonte de alimentación de electroforese, o transiluminador LED azul, o transiluminador UV, o sistema de análise e imaxe de xel, etc. Tamén fornecen os instrumentos de laboratorio como o instrumento de PCR, o mesturador de vórtice e a centrífuga para o laboratorio.
Se tes algún plan de compra dos nosos produtos, non dubides en contactar connosco. Podes enviarnos unha mensaxe ao correo electrónico[correo electrónico protexido]ou[correo electrónico protexido], ou chámanos ao +86 15810650221 ou engade Whatsapp +86 15810650221 ou Wechat: 15810650221.
Escanee o código QR para engadir en Whatsapp ou WeChat.
Hora de publicación: 20-ago-2024