A semana pasada compartimos varias consideracións sobre o uso da electroforese de membrana de acetato de celulosa e remataremos este tema aquí hoxe para a súa referencia.
Selección de Concentración tampón
A concentración de tampón utilizada na electroforese de membrana de acetato de celulosa é xeralmente menor que a utilizada na electroforese de papel. O pH de uso común 8,6BO tampón arbitral adoita ser elixido dentro do intervalo de 0,05 mol/L a 0,09 mol/L. Ao seleccionar a concentración, faise unha determinación preliminar. Por exemplo, se a lonxitude da tira de membrana entre os electrodos da cámara de electroforese é de 8-10 cm, requírese unha tensión de 25 V por centímetro de lonxitude da membrana e a intensidade de corrente debe ser de 0,4-0,5 mA por centímetro de ancho da membrana. Se estes valores non se alcanzan ou se superan durante a electroforese, a concentración de tampón debe aumentarse ou diluirse.
Unha concentración de tampón excesivamente baixa producirá un movemento rápido das bandas e un aumento do ancho da banda. Por outra banda, unha concentración de tampón excesivamente alta ralentizará a migración da banda, dificultando a distinción de certas bandas de separación.
Cómpre sinalar que na electroforese de membrana de acetato de celulosa, unha parte importante da corrente lévase a cabo a través da mostra, o que xera unha cantidade considerable de calor. Ás veces, a concentración de tampón elixida pode considerarse axeitada. Non obstante, en condicións de aumento da temperatura ambiental ou cando se utiliza unha tensión máis elevada, a evaporación da auga debido á calor pode intensificarse, producindo unha concentración de tampón excesivamente alta e mesmo provocando que a membrana se seque.
Volume de mostra
Na electroforese de membrana de acetato de celulosa, a cantidade de volume da mostra está determinada por varios factores, incluíndo as condicións de electroforese, as propiedades da propia mostra, os métodos de tinción e as técnicas de detección. Como principio xeral, canto máis sensible sexa o método de detección, menor será o volume da mostra, o que é vantaxoso para a separación. Se o volume da mostra é excesivo, os patróns de separación electroforéticos poden non estar claros e a cor tamén pode levar moito tempo. Non obstante, cando se analizan cuantitativamente as bandas tinguidas separadas mediante métodos de detección colorimétricos de elución, o volume da mostra non debe ser demasiado pequeno, xa que pode producir valores de absorbancia máis baixos para determinados compoñentes, o que provoca erros máis altos no cálculo do seu contido. Nestes casos, o volume da mostra debe aumentarse adecuadamente.
Normalmente, o volume de mostra engadido en cada centímetro da liña de aplicación da mostra varía de 0,1 a 5 μL, o que equivale a unha cantidade de mostra de 5 a 1000 μg. Por exemplo, na análise rutineira de electroforese de proteínas séricas, o volume de mostra engadido en cada centímetro da liña de aplicación xeralmente non supera 1 μL, o que equivale a 60 a 80 μg de proteína. Non obstante, cando se analizan lipoproteínas ou glicoproteínas mediante o mesmo método de electroforese, o volume da mostra debe aumentarse de forma correspondente.
En conclusión, o volume de mostra máis axeitado debe seleccionarse en función de condicións específicas mediante unha serie de experimentos preliminares.
Selección da solución de tinción
As bandas separadas na electroforese da membrana de acetato de celulosa tíñense normalmente antes da detección. Os diferentes compoñentes da mostra requiren diferentes métodos de cor e os métodos de cor adecuados para a electroforese de membrana de acetato de celulosa poden non ser totalmente aplicables ao papel de filtro.
Hai tres principios principais para escoller a solución de cormembrana de acetato de celulosa. En primeiro lugar,Os colorantes solubles en auga deben ser preferidos aos colorantes solubles en alcohol para evitar a contracción da membrana e a deformación causada pola solución de cor deste último. Despois da cor, é importante lavar a membrana con auga e minimizar a duración da cor. En caso contrario, a membrana pode enroscarse ou encollerse, o que afectaría a detección posterior.
En segundo lugar, é preferible seleccionar colorantes con forte afinidade de cor para a mostra. Na electroforese de membrana de acetato de celulosa de proteínas séricas, o amino negro 10B utilízase habitualmente debido á súa forte afinidade de cor por varios compoñentes proteicos do soro e á súa estabilidade.
En terceiro lugar, deben escollerse colorantes de calidade fiables. Algúns colorantes, a pesar de ter o mesmo nome, poden conter impurezas que dan lugar a un fondo especialmente escuro despois da cor. Isto pode incluso difuminar as bandas orixinalmente ben separadas, o que dificulta a súa distinción.
Por último, é importante a elección da concentración da solución de cor. Teoricamente, pode parecer que unha maior concentración de solución de coloración levaría a unha cor máis completa dos compoñentes da mostra e uns mellores resultados de cor. Non obstante, este non é o caso. A afinidade de unión entre os compoñentes da mostra e o colorante ten un certo límite, que non aumenta co aumento da concentración da solución de cor. Pola contra, unha concentración de solución de coloración excesivamente alta non só desperdicia o colorante senón que tamén dificulta a obtención dun fondo claro. Ademais, cando a intensidade da cor alcanza un determinado valor máximo, a curva de absorbancia do colorante non segue unha relación lineal, especialmente nas medicións cuantitativas. Na electroforese de membrana de acetato de celulosa, a concentración da solución de cor é xeralmente menor que a utilizada na electroforese de papel.
Detalles para saber sobre Beijing Liuyi Biotechnology's membrana de acetato de celulosatanque de electroforese e a súa aplicación de electroforese, visite aquí:
lExperimento para separar proteínas séricas mediante membrana de acetato de celulosa
lElectroforese de membrana de acetato de celulosa
Se tes algún plan de compra dos nosos produtos, non dubides en contactar connosco. Podes enviarnos unha mensaxe ao correo electrónico[correo electrónico protexido]ou[correo electrónico protexido], ou chámanos ao +86 15810650221 ou engade Whatsapp +86 15810650221 ou Wechat: 15810650221.
Referencia:Electroforesis (Segunda edición) por Mr. Li
Hora de publicación: 06-06-2023