Que é a electroforese en xel de poliacrilamida?

Electroforese en xel de poliacrilamida

A electroforese en xel é unha técnica fundamental nos laboratorios de todas as disciplinas biolóxicas, que permite a separación de macromoléculas como ADN, ARN e proteínas. Diferentes medios e mecanismos de separación permiten que os subconxuntos destas moléculas se separen de forma máis eficaz explotando as súas características físicas. Para as proteínas en particular, a electroforese en xel de poliacrilamida (PAGE) adoita ser a técnica de elección.

A PAGE é unha técnica que separa macromoléculas como proteínas en función da súa mobilidade electroforética, é dicir, a capacidade dos analitos de desprazarse cara a un electrodo de carga oposta. En PAGE, isto está determinado pola carga, tamaño (peso molecular) e forma da molécula. Os analitos móvense a través dos poros formados en xel de poliacrilamida. A diferenza do ADN e do ARN, as proteínas varían en carga segundo os aminoácidos incorporados, o que pode influír no seu funcionamento. As cordas de aminoácidos tamén poden formar estruturas secundarias que afectan o seu tamaño aparente e, en consecuencia, como poden moverse polos poros. Polo tanto, ás veces pode ser desexable desnaturalizar as proteínas antes da electroforese para linealizalas se se precisa unha estimación máis precisa do tamaño.

PÁXINA SDS

A electroforese en xel de poliacrilamida con dodecil sulfato de sodio é unha técnica utilizada para separar moléculas de proteínas de masas de 5 a 250 kDa. As proteínas sepáranse unicamente en función do seu peso molecular. O dodecilsulfato de sodio, un tensioactivo aniónico, engádese na preparación de xeles que enmascaran as cargas intrínsecas das mostras de proteínas e dálles unha relación carga/masa similar. En palabras sinxelas, desnaturaliza as proteínas e dálles unha carga negativa.

PÁXINA nativa

Native PAGE é unha técnica que utiliza xeles non desnaturalizados para a separación de proteínas. A diferenza da SDS PAGE, non se engade ningún axente desnaturalizante na preparación dos xeles. Como resultado, a separación das proteínas ten lugar en función da carga e do tamaño das proteínas. Nesta técnica, a conformación, o pregamento e as cadeas de aminoácidos das proteínas son os factores dos que depende a separación. As proteínas non se danan neste proceso e pódense recuperar despois de completar a separación.

Como funciona a electroforese en xel de poliacrilamida (PAGE)?

O principio básico de PAGE é separar os analitos pasándoos polos poros dun xel de poliacrilamida mediante unha corrente eléctrica. Para conseguir isto, polimerízase unha mestura de acrilamida-bisacrilamida (poliacrilamida) mediante a adición de persulfato de amonio (APS). A reacción, que é catalizada pola tetrametiletilendiamina (TEMED), forma unha estrutura en forma de rede con poros polos que se poden mover os analitos (Figura 2). Canto maior sexa a porcentaxe de acrilamida total incluída no xel, menor será o tamaño dos poros, polo que máis pequenas serán as proteínas que poderán pasar. A proporción de acrilamida e bisacrilamida tamén afectará o tamaño dos poros, pero adoita manterse constante. Os tamaños de poros máis pequenos tamén reducen a velocidade á que as proteínas pequenas son capaces de moverse a través do xel, mellorando a súa resolución e evitando que se escorren ao tampón rapidamente cando se aplica corrente.

Equipos para Electroforesis en Gel de Poliacrilamida

Celda de electroforese en xel (tanque/cámara)
O tanque de xel para a electroforese en xel de poliacrilamida (PAGE) é diferente do tanque de xel de agarosa. O tanque de xel de agarosa é horizontal, mentres que o depósito PAGE é vertical. Mediante unha célula de electroforese vertical (tanque/cámara), bótase un xel fino (normalmente de 1,0 mm ou 1,5 mm) entre dúas placas de vidro e colócase de xeito que a parte inferior do xel estea mergullada nun tampón nunha cámara e a parte superior nun tampón. noutra cámara. Cando se aplica corrente, unha pequena cantidade de tampón migra a través do xel da cámara superior á cámara inferior. Con abrazadeiras fortes para garantir que a montaxe se mantén en posición vertical, o equipo facilita as execucións rápidas do xel cun arrefriamento uniforme que resulta en bandas distintas.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) fabrica unha variedade de tamaños de células de electroforese en xel de poliacrilamida (tanques/cámaras). Os modelos DYCZ-20C e DYCZ-20G son células de electroforese verticais (tanques/cámaras) para a análise de secuenciación de ADN. Algunhas das células de electroforese verticais (tanques/cámaras) son compatibles co sistema de transferencia, como os modelos DYCZ-24DN, DYCZ-25D e DYCZ-25E son compatibles co sistema Western Blotting modelo DYCZ-40D, DYCZ-40G e DYCZ-40F, que se utilizan para transferir a molécula de proteína do xel á membrana. Despois da electroforese SDS-PAGE, o Western Blotting é unha técnica para detectar unha proteína específica nunha mestura de proteínas. Podes escoller estes sistemas de transferencia segundo os requisitos experimentais.

Fonte de alimentación de electroforese
Para proporcionar a electricidade para o funcionamento do xel, necesitará unha fonte de alimentación de electroforese. En Liuyi Biotechnology ofrecemos unha gama de fontes de alimentación de electroforese para todas as aplicacións. O modelo DYY-12 e DYY-12C con alta tensión e corrente estables poden cumprir a electroforese dos requisitos de alta tensión. Ten a función de soporte, temporización, VH e aplicación paso a paso. Son ideais para a aplicación de electroforese de secuenciación de ADN e IEF. Para a aplicación xeral de electroforese de proteínas e ADN, temos o modelo DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, etc. Estes pódense usar para aplicacións de electroforese de media e baixa tensión, como para uso en laboratorios escolares, laboratorios hospitalarios, etc. Máis modelos para fontes de alimentación, visite o noso sitio web.

A marca Liuyi ten máis de 50 anos de historia en China e a empresa pode ofrecer produtos estables e de alta calidade en todo o mundo. A través de anos de desenvolvemento, é digno da súa elección!

Para obter máis información sobre nós, póñase en contacto connosco por correo electrónico[correo electrónico protexido] or [correo electrónico protexido].

Referencias para Que é a electroforese en xel de poliacrilamida?
1. Karen Steward PhD Electroforese en xel de poliacrilamida, como funciona, variantes técnicas e as súas aplicacións