Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) é unha técnica sensible e rápida que se usa principalmente para detectar danos no ADN e reparalos en células individuais. O nome "Comet Assay" provén da característica forma de cometa que aparece nos resultados: o núcleo da célula forma a "cabeza", mentres que os fragmentos de ADN danados migran, creando unha "cola" que se asemella a un cometa.
Principio
O principio do Ensaio Cometa baséase na migración de fragmentos de ADN nun campo eléctrico. O ADN intacto permanece dentro do núcleo celular, mentres que o ADN danado ou fragmentado migra cara ao ánodo, formando a "cola" do cometa. A lonxitude e intensidade da cola son directamente proporcionais á extensión do dano no ADN.
Procedemento
- Preparación celular: As células que se van a probar mestúranse con agarosa de baixo punto de fusión e espállanse sobre portas de microscopio para formar unha capa uniforme.
- Lise celular: Os portas son mergullados nunha solución de lise para eliminar a membrana celular e a membrana nuclear, deixando ao descuberto o ADN.
- Electroforese: Os portas colócanse nunha cámara de electroforese en condicións alcalinas ou neutras. Os fragmentos de ADN danados migran cara ao electrodo positivo baixo a influencia do campo eléctrico.
- Tinción: Despois da electroforese, as láminas téñense cun colorante fluorescente (por exemplo, bromuro de etidio) para visualizar o ADN.
- Análise microscópica: Mediante un microscopio de fluorescencia ou un software especializado, analízanse as formas dos cometas e mídense parámetros como a lonxitude da cola e a intensidade.
Imaxe de biorender
Análise de datos
Os resultados do ensaio Comet avalíanse en función de varios parámetros clave:
- Lonxitude da cola: Representa a distancia que migra o ADN, indicando a extensión do dano no ADN.
- Contido de ADN da cola: A porcentaxe de ADN que migra cara á cola, que se usa a miúdo como medida cuantitativa do dano no ADN.
- Olive Tail Moment (OTM): Combina tanto a lonxitude da cola como o contido de ADN da cola para proporcionar unha medida máis completa do dano no ADN.
Aplicacións
- Estudos de xenotoxicidade: O Ensaio Comet utilízase amplamente para avaliar os efectos de produtos químicos, fármacos e radiación no ADN celular, polo que é unha ferramenta clave para as probas de xenotoxicidade.
- Toxicoloxía Ambiental: Axuda a analizar o impacto dos contaminantes ambientais no ADN dos organismos, proporcionando información sobre a seguridade dos ecosistemas.
- Investigación Médica e Clínica: O ensaio Comet úsase para estudar os mecanismos de reparación do ADN, o cancro e outras enfermidades relacionadas co ADN. Tamén avalía o impacto das terapias contra o cancro como a radioterapia e a quimioterapia no ADN.
- Ciencias da agricultura e da alimentación: Úsase para avaliar a seguridade de pesticidas, aditivos alimentarios e outras substancias, e para estudar os seus efectos tóxicos en modelos animais.
Vantaxes
- Alta Sensibilidade: Capaz de detectar niveis baixos de danos no ADN.
- Operación sinxela: A técnica é sinxela, polo que é adecuada para cribado de alto rendemento.
- Amplia aplicación: Pódese aplicar a varios tipos de células, incluíndo células animais e vexetais.
- Retos de cuantificación: Aínda que proporciona datos cualitativos sobre danos no ADN, a análise cuantitativa depende en gran medida do software e das técnicas de análise de imaxes.
- Condicións experimentais: Os resultados poden verse influenciados por factores como o tempo de electroforese e o pH, que requiren un control coidadoso das condicións experimentais.
Limitacións
O Ensaio Comet é unha ferramenta inestimable na investigación biomédica, na ciencia ambiental e no desenvolvemento de fármacos debido á súa flexibilidade e alta sensibilidade na detección e reparación do ADN. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)ofrece cámara de electroforese horizontal para o ensaio de cometas. Benvido a contactar connosco para falar sobre oEnsaio de cometasprotocolo.
Beijing Liuyi Biotechnology Co Ltd (Liuyi Biotechnology) especializouse na fabricación de instrumentos de electroforese durante máis de 50 anos co noso propio equipo técnico profesional e centro de I + D. Temos unha liña de produción fiable e completa, desde o deseño ata a inspección e o almacén, así como soporte de mercadotecnia. Os nosos principais produtos son a célula de electroforese (tanque/cámara), a fonte de alimentación de electroforese, o transiluminador LED azul, o transiluminador UV, o sistema de análise e imaxe de xel, etc. Tamén fornecen os instrumentos de laboratorio como o instrumento de PCR, o mesturador de vórtice e a centrífuga para o laboratorio.
Se tes algún plan de compra dos nosos produtos, non dubides en contactar connosco. Podes enviarnos unha mensaxe ao correo electrónico[correo electrónico protexido]ou[correo electrónico protexido], ou chámanos ao +86 15810650221 ou engade Whatsapp +86 15810650221 ou Wechat: 15810650221.
Escanee o código QR para engadir en Whatsapp ou WeChat.
Hora de publicación: 20-09-2024