A electroforese en xel é un dos principais métodos utilizados en bioloxía molecular para a análise do ADN.Este método consiste na migración de fragmentos de ADN a través dun xel, onde se separan segundo o tamaño ou a forma.Non obstante, atopaches algún erro durante os teus experimentos de electroforese, como bandas manchadas no xel de agarosa ou sen bandas no xel?Cal pode ser a causa destes erros?
Os nosos técnicos resumiron aquí algunhas das solucións de problemas para a súa referencia.
1. Bandas untadas en xel de agarosa
●O ADN foi degradado.Evitar a contaminación por nucleasas.
● O tampón de electroforese non está fresco.Despois do uso repetido do tampón de electroforese, a forza iónica diminúe e o seu valor de pH aumenta, polo que a capacidade do tampón debilita, o que afecta o efecto de electroforese.Recoméndase substituír o tampón de electroforese con frecuencia.
● Utilizáronse condicións de electroforese inadecuadas.Non permita que a tensión supere os 20 V/cm e manteña unha temperatura <30 °C durante a electroforese.Para a electroforese de cadeas de ADN xigante, a temperatura debe ser <15 ° C. Comproba que o tampón de electroforese ten capacidade de tampón suficiente.
● Cargouse demasiado ADN no xel.Diminuír a cantidade de ADN.
● Demasiada sal no ADN.Use a precipitación de etanol para eliminar o exceso de sales de forma avanzada.
● O ADN estaba contaminado con proteínas.Use extraccións de fenoles para eliminar proteínas de forma avanzada.
● O ADN foi desnaturalizado.Non quentar antes da electroforese.Diluír o ADN en tampón con NaCl 20 mM.
2. Anomalías da migración da banda de ADN
● Renaturalización do sitio COS do fragmento λHind III.Quenta o ADN durante 5 minutos a 65 °C antes da electroforese e despois arrefríao na unidade de xeo durante 5 minutos.
● Utilizáronse condicións de electroforese inadecuadas.Non permita que a tensión supere os 20 V/cm e manteña unha temperatura <30 °C durante a electroforese.Comprobe que o tampón de electroforese ten capacidade de tampón suficiente.
● O ADN foi desnaturalizado.Non quentar antes da electroforese.Diluír o ADN en tampón con NaCl 20 mM.
3. Bandas de ADN débiles ou nulas en xel de agarosa
● Non había cantidade ou concentración suficiente de ADN cargado no xel.Aumentar a cantidade de ADN.A electroforese en xel de poliacrilamida é lixeiramente máis sensible que a electroforese con agarosa, e a carga da mostra pódese reducir adecuadamente.
● O ADN foi degradado.Evitar a contaminación por nucleasas.
● O ADN foi sometido a electroforesis do xel.Electroforese o xel durante menos tempo, use unha tensión máis baixa ou use un xel por cento máis alto.
● Utilizouse unha fonte de luz W inadecuada para a visualización do ADN tinguido con bromuro de etidio.Use unha luz W de lonxitude de onda curta (254 nm) para unha maior sensibilidade.
4. Faltan as bandas de ADN
●O ADN de pequeno tamaño foi sometido a electroforesis do xel.Electroforese o xel durante menos tempo, use unha tensión máis baixa ou use un xel por cento máis alto.
● Difícil de distinguir as bandas de ADN de moléculas similares.Aumentar o tempo de electroforese e comprobar a concentracióndo xel para asegurarse de que o xel por cento correctamente se utilizará.
● O ADN foi desnaturalizado.Non quentar antes da electroforese.Diluír o ADN en tampón con NaCl 20 mM.
● As cadeas de ADN son enormes e a electroforese convencional en xel non é adecuada.Análise de electroforese en xel de pulso.Que outros problemas tivo coa electroforese en xel de agarosa?No futuro investigaremos máis guías.
Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) é unha empresa especializada que se centra en produtos relacionados coa electroforese en China.A súa historia comeza en 1970 cando China aínda non entrara na reforma e no tempo de apertura.Ao longo de anos de desenvolvemento, Liuyi Bitotech ten a súa propia marca, coñecida como a marca Liuyi no mercado interno de produtos de electroforese.
A marca Liuyi ten máis de 50 anos de historia en China e a empresa pode ofrecer produtos estables e de alta calidade en todo o mundo.A través de anos de desenvolvemento, é digno da súa elección!
As células de electroforese horizontais (tanques/cámaras) de Liuyi Biotech son de alta calidade con boa aparencia.Con diferentes tamaños de bandexas de xel, poden satisfacer os seus diferentes requisitos experimentais.Temos o noso propio equipo técnico e fábrica.Desde o deseño ata a fabricación, as materias primas ata as pezas clave, podemos controlar todo o proceso.A serie DYCP 31 é para electroforese de ADN, que son modelosDYCP-31BN, DYCP-31CN,DYCP-31DN, eDYCP-31E.As diferenzas entre eles son o tamaño e o prezo do xel.Ofrecemos produtos de tamaño completo para os nosos clientes.O modeloDYCP-32Cpode facer o xel máis grande de 250 mm * 250 mm.
Mentres tanto, recomendamos a nosa fonte de alimentación de electroforeseDYY-6C,DYY-6DeDYY-10Cpara as nosas células de electroforese (tanques/cámaras) series DYCP-31 e 32.
Se queres máis información sobre os produtos, visita este sitio web para obter máis información e póñase en contacto connosco por correo electrónico para informarnos o que queres e ver se podemos ofrecerche as solucións.
Para obter máis información sobre nós, póñase en contacto connosco por correo electrónico[correo electrónico protexido], [correo electrónico protexido].
Hora de publicación: maio-09-2022